薄层层析法(TLC)测定螺菌黄质系类胡萝卜素的相对极性和稳定性

The relative polarity and stability of each carotenoid of spirilloxanthin biosynthesis pathway by thin-layer chromatography (TLC)

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摘要[目的]阐明不产氧光合细菌螺菌黄质系类胡萝卜素(Car)之间的相对极性和稳定性关系及规律.[方法]以沼泽红假单胞菌CQV97为材料,采用薄层层析(TLC),结合图像灰度分析、吸收光谱和HPLC等方法,探求了螺菌黄质系Car合成途径中各Car组分之间的相对极性、光谱特性和光稳定性规律.[结果]TLC能将CQV97菌株积累的7种Car分离,分别为Lycopene(C 1)、Rhodopin (C2)、3,4-Didehydrorhodopin (C3)、Anhydrorhodovibrin (C4)、Rhodovibrin (C5)、OH-spirilloxanthin (C6)和Spirilloxanthin (C7);其相对极性由低到高顺序是C1、C4、C7、C5、C6、C2、C3;依据特征性吸收光谱,这7种Car分为3个群,分别为C1和C2,C3、C4和C5,C6和C7,Car合成过程中脱氢反应使Car分子共轭体系增大,引起光谱较大幅度的红移(约10 nm),而水化和羟基甲基化反应则引起较小幅度红移(0-4 nm);光照条件下,7种Car在TLC板上均不很稳定,其半衰期在54-137 min,稳定性顺序依次为C2＞C3≈C7＞C5≈C4≈Cl ≈C6.黑暗条件下,7种Car均在90 min内稳定,稳定性顺序与光照条件基本一致.[结论]TLC能够良好地展示出螺菌黄质系途径中积累的7种Car.TLC板上的Car组分对光敏感,黑暗时短期稳定.本研究将有助于APB Car的TLC快速鉴别,为快速筛选高稳定性Car提供思路和参考.