换一批摘要[目的]克隆交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.) BYS-2的褐藻胶裂解酶基因,实现其在大肠杆菌细胞中异源表达,对分离纯化的重组酶进行酶学性质研究.[方法]以交替假单胞菌BYS-2菌株基因组DNA为模板,克隆得到褐藻胶裂解酶基因alg738,构建重组基因工程菌BL21 (DE3)/pET22b-alg 738,诱导表达,表达产物通过Ni-NTA树脂纯化后进行酶学性质研究.[结果]重组酶的最适反应pH为8.0,在pH 6.0-9.0范围内37℃保温lh仍能保持84％以上的相对酶活力,具有较好的pH稳定性;最适反应温度为45℃,热稳定性实验显示在37℃下保温60 min其残余酶活力仍达66.6％;在5 mmol/L浓度下,Na+、Mg2+、Mn2+对该酶具有明显的促进作用,Ni2+、C02+、Cu2+、Hg2+、Zn2+、EDTA、β-巯基乙醇、SDS具有明显的抑制作用.动力学参数Km、Vmax分别为1.11 g/L和0.011 g/(L.min),底物特异性分析表明该重组酶为偏好聚甘露糖醛酸钠(Poly M)裂解作用的双功能酶.[结论]重组褐藻胶裂解酶具有良好的酶学特性,为褐藻胶裂解酶的开发应用打下基础.
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关键词
褐藻胶裂解酶交替假单胞菌克隆表达重组酶酶学性质Alginate lyasePseudoalteromonas sp.Cloning and expressionRecombinant enzymeCharacterization
栏目名称
DOI
10.13344/j.microbiol.china.160518
发布时间
2017-07-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
State Oceanic Administration of Marine Public Welfare Industry Research（(201305015)）
Enterprise Technology Innovation Project of Fujian Province
Fuzhou Science and Technology Project （(No.2016X0005)国家海洋局海洋公益性行业科研专项项目(201305015)）
福建省企业技术创新项目
福州市科技计划项目（(2016X0005)）
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