换一批Ⅱ型鲤疱疹病毒ORF4的多克隆抗体制备及其组织分布
Prokaryotic expression, polyclonal antibody preparation and tissue-tropism analysis of cyprinid herpesvirus Ⅱ non-structural protein ORF4
摘要[目的]制备Ⅱ型鲤疱疹病毒(CyHV-2) ORF4多克隆抗体,利用免疫学方法研究ORF4编码蛋白在病毒感染过程中的组织表达特征.[方法]利用在线软件SMART和BLASTx分析CyHV-2ORF4序列,采用PCR技术从CyHV-2基因组中扩增得到ORF4基因,克隆至表达载体PGEX-4T-3中,将获得的重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达,表达产物经过SDS-PAGE和Westem blot鉴定,再利用亲和层析法纯化出重组蛋白.用纯化的重组ORF4蛋白免疫新西兰兔,收集兔血,分离兔血清获得抗ORF4蛋白的多克隆抗体,再利用Western blot检测抗体与ORF4蛋白之间的特异性.提取攻毒后的异育银鲫肌肉、脑、鳃、脾脏、肝胰脏、心脏、肾脏等组织DNA,用荧光定量PCR技术监测其病毒在各组织的复制水平.使用RIPA裂解液提取上述各组织总蛋白,再利用Westem blot技术检测ORF4在感染CyHV-2的异育银鲫各组织中的表达情况.[结果]原核表达的重组ORF4蛋白分子量为65 kD,与预期大小一致;获得的ORF4抗血清能特异性识别重组ORF4蛋白.病毒感染的异育银鲫体内ORF4主要表达在肾脏、脾脏和鳃上;荧光定量PCR证明CyHV-2主要在肾脏、脾脏和鳃上富集.[结论]CyHV-2的非结构蛋白ORF4可能参与病毒的复制,是病毒复制感染周期的特征性指示蛋白之一,这为深入研究ORF4在CyHV-2感染过程中的作用机制提供参考.
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关键词
Ⅱ型鲤疱疹病毒ORF4原核表达多克隆抗体组织分布Cyprinid herpesvirus 2ORF4Prokaryotic expressionPolyclonal antibodyTissue distribution
栏目名称
DOI
10.13344/j.microbiol.china.170043
发布时间
2017-09-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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