换一批摘要[目的]实现单核增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)和杰氏棒杆菌(Corynebacterium jeikeium) L-天冬氨酸α-脱羧酶基因在Escherichia coli中异源表达,纯化重组蛋白并对其进行酶学性质分析.[方法]依照E.coli的密码子偏好性优化来源于L.monocytotogens和C.eikeium的panD基因序列.人工合成后以此构建表达载体p ET28a(+)-panDLm和pET28a(+)-panDCj,转化E.coli BL21(DE3),实现panDLm和panDC.j基因的异源表达.利用亲和层析纯化获得携带组氨酸标签的纯酶后进行酶学性质研究,并考察底物对酶反应的影响.[结果]重组菌蛋白电泳分析结果表明,重组酶PanDL.m和PanDC.j均有自加工功能,裂解后形成了α亚基和β亚基.重组酶比酶活分别为8.9 U/mg和11.8 U/mg.两种酶的最适反应温度均为60℃,最适pH分别为7.0和6.0,它们都在30-50℃,酸性条件下较稳定.与目前研究最多的谷氨酸棒杆菌(Corynebacteriumglutamicum)来源的PanDC.g相比,PanDL.m受底物天冬氨酸的抑制作用较小.[结论]PanDL.m和PanDCj可在高温酸性条件下特异性转化L-天冬氨酸生成β-丙氨酸,其中PanDL.m受底物的抑制作用较小,具有一定的工业应用潜力.
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关键词
L-天冬氨酸α-脱羧酶β-丙氨酸单核增生李斯特菌杰氏棒杆菌酶学性质L-aspartate α-decarboxylaseβ-AlanineListeria monocytogenesCorynebacterium jeikeiumEnzymatic properties
栏目名称
DOI
10.13344/j.microbiol.china.170009
发布时间
2017-11-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
National Natural Science Foundation of China（(31401674)）
The 13th Five-Year National Key Program for Technology Research and Development of China Plan Grant （(No.2016YFD0401400)国家自然科学基金青年基金项目(31401674)）
“十三五”国家重点研发计划项目（(2016YFD0401400)）
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