来源于Micrococcus luteus的复苏促进因子异源表达及其对活性污泥中休眠细菌的促生长作用

Heterologous expression of resuscitation promoting factor from Micrococcus luteus and promotes growth dormant bacteria from activated sludge

摘要[背景]复苏促进因子 (Resuscitation promoting factor,RPF) 是由某些放线菌分泌的一类活性蛋白质,最初在Micrococcusluteus中被发现.它不但能够复苏休眠细菌恢复生长,而且对正常的细菌也有促生长效果.然而关于RPF对于环境样品中除原始宿主以外细菌的复苏促进作用研究还鲜有报道.[目的]以寻找新的菌种资源、开发环境功能菌角度研究了RPF对环境样品中潜在休眠菌群的复苏促进作用.[方法]首先对来源于Micrococcus luteus IAM 14879的RPF (M/ RPF) 蛋白序列进行生物信息学分析和同源模建;随后克隆了M/RPF编码基因并在大肠杆菌中异源表达;最后利用重组Ml RPF对活性污泥样品中潜在的休眠细菌开展了复苏促生长研究.[结果]M/RPF在进化树上处于单独分支,远离其它RPF家族成员;模建结构分析表明M/RPF具有与C型溶菌酶相似的催化结构域,这有助于解释RPF家族蛋白具有溶解酶活性;重组Ml RPF在大肠杆菌中获得了可溶性表达,它能够促进休眠态M. luteus IAM 14879生长,保留了其生理活性;利用重组Ml RPF从某污水厂活性污泥样品中分离获得了Dietzia、Paracoccus、Rhodococcus和Brevundimonas菌株.[结论]为环境样品中微生物多样性研究及特殊微生物资源的发掘提供新的方法,也为基于M/RPF的废水生物强化处理技术研发提供理论依据.