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猪伪狂犬病病毒流行株HLJ-01的分离鉴定及致病性分析

Isolation and pathogenicity of a pseudorabies virus variant HLJ-01

摘要[背景]自2011年以来,猪伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)发生变异,经典的疫苗株已不能完全抵抗PRV变异株的感染,国内多个猪场出现伪狂犬病的暴发,PRV变异毒株开始在我国大规模流行.[目的]通过分离PRV流行变异毒株,并对其进行遗传进化和致病性分析,为PRV流行病学调查及疫苗研制提供实验数据.[方法]采集黑龙江某猪场感染PRV的脑组织病料,根据GenBank PRV gE和gB保守序列设计引物,进行PCR鉴定.通过对gE和gC基因进行序列测定和遗传进化分析.利用BHK-21细胞分离病毒,采用噬斑纯化方法对病毒进行纯化.通过电镜、间接免疫荧光对病毒进行鉴定,测定病毒生长曲线并进行致病性研究.[结果]经PCR和测序鉴定分离株为PRV流行株,将其命名为HLJ-01.遗传进化分析结果显示,该分离毒株与我国近几年分离的流行变异株位于同一分支;氨基酸序列分析结果显示,gE和gC存在国内流行变异株的特征序列,表明该分离毒株为流行变异株.生长曲线显示,分离株HLJ-01在感染48 h时滴度最高(108.5 TCID50/mL).电镜观察结果显示,病毒颗粒直径约150 nm,呈球形,有囊膜,囊膜外有放射状纤突,呈现典型PRV病毒特征.动物感染实验结果显示,107.0TCID50剂量感染组死亡率为100％;106.0TCID50剂量感染组死亡率为80％;105.0TCID50剂量感染组死亡率为60％.仔猪在接种病毒后均出现PRV感染的典型症状和病理变化,证实分离毒株对仔猪有较强致病力.[结论]分离获得一株猪伪狂犬病毒,经鉴定该分离株为流行变异株,而且具有较强的致病力,这为PRV流行病学分析及疫苗候选株的筛选奠定了基础.