摘要[背景]Ras-GTP酶活化蛋白SH3结构域结合蛋白1(Ras-GTPase-activating protein SH3 domain binding protein 1,G3BP1)是应激颗粒(stress granule,SG)的重要组成部分和标志性蛋白,在宿主抵抗病原体入侵过程中发挥重要作用.[目的]构建G3BP1稳定敲低的PK-15细胞系,探究敲低 G3BP1 基因对水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)、塞内卡病毒(seneca virus,SVV)和痘苗病毒(vaccinia virus,VACV)复制的影响和对肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor α,TNF-α)、白细胞介素 6(interleukin 6,IL-6)、抗黏病毒蛋白 1(myxovirus resistance protein 1,Mx1)、干扰素刺激基因54(IFN-stimulated gene 54,ISG54)和干扰素β(interferon β,IFN-β)表达的影响,并对该基因进行生物信息学分析.[方法]利用慢病毒载体构建稳定敲低G3BP1基因的PK-15细胞系,利用逆转录实时定量 PCR(reverse transcription quantitative real-time PCR,RT-qPCR)和实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)分析敲低 G3BP1 基因对 VSV、SVV 和 VACV 复制的影响,利用 RT-qPCR 分析感染 VSV、SVV 和 VACV 后敲低 G3BP1 基因对 TNF-α、IL-6、Mx1、ISG54和IFN-β的影响,通过在线工具对G3BP1基因进行生物信息学分析.[结果]RT-qPCR和免疫印迹(Western blotting,WB)结果显示成功构建稳定敲低G3BP1的PK-15细胞系;RT-qPCR和qPCR结果显示敲低G3BP1基因可极显著促进VSV和SVV的复制(P＜0.000 1),但对VACV的复制无显著影响(P＞0.05);RT-qPCR结果显示VSV和SVV感染可显著或极显著促进TNF-α、IL-6、Mx1、ISG54和IFN-β的mRNA表达水平(P＜0.05,P＜0.000 1),敲低G3BP1基因可极显著抑制上述细胞因子的mRNA表达(P＜0.01,P＜0.000 1),RT-qPCR结果显示VACV感染可以极显著抑制上述细胞因子的mRNA表达(P＜0.01,P＜0.000 1),敲低G3BP1基因对VACV抑制的细胞因子mRNA表达无显著影响(P＞0.05);理化性质预测结果显示,猪源G3BP1蛋白存在30个磷酸化位点,具有不稳定性和亲水性,属于非跨膜和非分泌蛋白;蛋白质高级结构预测显示,该蛋白的二级结构主要由无规则卷曲(52.47％)组成,主要定位于细胞质和细胞核中,分别占34.38％和31.25％.[结论]本研究获得了猪源G3BP1基因稳定敲低的PK-15细胞系,敲低该基因可极显著促进VSV和SVV的复制,但对VACV的复制无显著影响;敲低该基因可显著或极显著抑制TNF-α、IL-6、Mx1、ISG54和IFN-β的产生;预测该蛋白存在30个磷酸化位点,为非跨膜和非分泌蛋白,具有不稳定性和亲水性.这些结果可为进一步研究G3BP1在病毒感染过程中的作用机制提供工具和参考依据.