换一批
换一批基于CRISPR-Cas13a的人腺病毒B亚属检测方法的建立
Establishment of human adenovirus species B detection method based on CRISPR-Cas13a
摘要[背景]人腺病毒B亚属(human adenovirus species B,HAdV-B)可引起呼吸道感染和重症肺炎,患者死亡率高,目前缺乏快速、准确的检测方法.[目的]开发一种高特异、高灵敏、操作简便的HAdV-B检测方法.[方法]在人腺病毒E4 基因区筛选出HAdV-B的保守序列并选取了特异性重组酶辅助扩增(recombinase-aided amplification,RAA)引物和CRISPR RNA(crRNA),建立结合RAA技术、CRISPR-Cas13a系统和消线法核酸检测试纸技术(easy-readout and sensitive enhanced,ERASE)的针对HAdV-B的核酸快速检测方法.[结果]该方法在 35 min的检测时间里,可检测到低至 100 copy/μL的HAdV-B DNA,该方法的灵敏度与实时荧光定量PCR相当,与其他呼吸道病原体无交叉反应.模拟样本检测结果显示能检测到Ct值为 36.19 的弱阳性样本.[结论]本研究建立的针对 HAdV-B 试纸的检测方法能够简单、快速、准确地检测目标核酸,无需专业核酸检测设备,为HAdV-B的检测提供了新的方法.
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关键词
CRISPR人腺病毒等温扩增核酸检测ERASE试纸CRISPRhuman adenovirusisothermal amplificationnucleic acid detectionERASE strips
栏目名称
生物实验室
DOI
10.13344/j.microbiol.china.240150
发布时间
2024-11-26
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