换一批稳定表达猪Mx2蛋白的PK-15细胞系构建及鉴定
Construction and identification of a PK-15 cell line stably expressing porcine Mx2 protein
摘要[背景]猪Mx2蛋白是Mx蛋白家族中的一员,属于干扰素诱导的GTP酶,在宿主抗病毒免疫反应中发挥关键作用.[目的]为探究猪Mx2蛋白的功能特性,通过慢病毒载体系统构建稳定表达猪Mx2蛋白的PK-15细胞系.[方法]根据GenBank数据库中猪Mx2基因的核苷酸序列设计特异性引物,扩增出目的基因后构建重组慢病毒质粒,利用三质粒系统转染HEK293T细胞包装慢病毒,将获得的重组慢病毒感染PK-15细胞,经嘌呤霉素筛选,获得稳定表达猪Mx2蛋白的PK-15细胞系,使用CCK-8法对细胞系的活力进行检测,利用Western blotting方法分析构建细胞系的猪Mx2蛋白表达水平,并利用实时荧光定量PCR、Western blotting和半数组织培养感染剂量(tissue culture infectious dose 50％,TCID50)评价细胞系对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)复制的影响.[结果]构建了稳定表达猪Mx2蛋白的PK-15细胞系.相较于野生型PK-15细胞,猪Mx2蛋白稳定表达细胞系中猪Mx2表达量显著上升,并且对PRV的复制具有抑制作用.[结论]PK-15细胞系的构建为深入探究猪Mx2蛋白的功能特性以及抗病毒作用机制提供了重要的工具.
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关键词
Ⅱ型黏病毒抗性蛋白(Mx2)慢病毒包装PK-15细胞系伪狂犬病病毒myxovirus resistance Ⅱ(Mx2)lentiviral packagingPK-15 cell linepseudorabies virus(PRV)
栏目名称
DOI
10.13344/j.microbiol.china.250218
发布时间
2025-12-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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