换一批
换一批融合蛋白M-IL-2(88Arg,125Ala)在毕赤酵母中的表达及抗肿瘤活性研究
Expression & Antitumor Activity of Fusion Protein M-IL-2 (88Arg, 125Ala) in Pichia pastoris
摘要构建融合基因蜂毒肽(melittin)与人变构白介素2(M-IL-2(88Arg,125Ala))毕赤酵母分泌型表达载体pPICZα A/M-IL-2(88Arg,125Ala),转化毕赤酵母菌株KM71H,甲醇诱导筛选出的多拷贝阳性菌株表达融合蛋白,纯化融合蛋白,并进行初步的抗肿瘤活性研究.经测序及PCR鉴定,M-IL-2(88Arg,125Ala)正确插入pPICZαA中,电转化后,重组载体通过同源重组整合到酵母基因组中,SDS-PAGE检测在26 ku左右有明显目的条带,与理论相符.经Western blot鉴定具有较高抗原性及特异性.BCA法测定甲醇诱导96 h融合蛋白表达量达315.2 mg/L.CCK-8法检测融合蛋白对人卵巢癌细胞SKOV3细胞及Hela细胞生长抑制作用,表明纯化的融合蛋白在体外能抑制人卵巢癌细胞SKOV3细胞及Hela细胞的生长增殖.该研究为融合蛋白M-IL-2(88Arg,125Ala)大规模制备和动物实验以及临床前期研究奠定了基础.
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关键词
M-IL-2(88Arg,125Ala)毕赤酵母表达纯化抗肿瘤活性M-IL-2 (88 Arg,125 Ala)Pichia pastorisexpressionpurificationantitumor activity
分类号
Q789
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1005-7021.2014.02.010
发布时间
2014-08-07
基金项目
山东省科技攻关项目（2007GG3WZ05009）；
山东省优秀中青年科学家科研奖励基金（BS2011SW005）
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