换一批
换一批融合双亲短肽提高腈水合酶的热稳定性研究
Enhancement of Nitrile Hydratase by Translational Fusion of Amphiphilic Short Peptide
摘要腈水合酶（ Nitirle hydratase，NHase）催化腈类物质转化为酰胺类物质，目前用于工业生产丙烯酰胺。但在催化过程中释放的热量易导致酶分子失活。研究通过蛋白质融合技术对腈水合酶进行分子改造，提高热稳定性。将2种双亲自组装肽（ self-assembling peptides，SAPs）EAK16和 ELK16分别融合至恶臭假单胞菌Pseudomonas putida NRRL-18668来源NHase非催化亚基β的N末端，构建出2种融合型NHase：EAK16-NHase和ELK16-NHase。经过表达、纯化后测定酶活力，发现EAK16-NHase和ELK16-NHase的酶活力分别为（426±14）U/mg和（372±12）U/mg，保留野生型酶活力的97%和85%。在50℃条件下孵育0~60 min，每5 min取样后测定残存酶活力，EAK16-NHase和 ELK16-NHase酶活力半衰期（ T50）分别为35 min 和40 min，野生型NHase为20 min。说明融合EAK16和ELK16均能提高NHase的热稳定性。研究表明融合SAPs能在不显著影响酶活力的条件下提高酶的热稳定性。
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关键词
双亲短肽融合蛋白腈水合酶酶催化热稳定性amphiphilicshortpeptidefusedproteinNitrilehydraseenzymecatalysisthermo-stability
分类号
Q936
DOI
10.3969/j.issn.1005-7021.2015.05.003
发布时间
2015-12-07
基金项目
国家863计划项目(2014AA021304)
国家自然科学基金项目(31400058)
江苏省自然科学基金(青年基金)项目
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