换一批
换一批鳙鱼过敏原小清蛋白基因的克隆表达、纯化及免疫学鉴定
Cloning, expression and purification of allergen parvalbumin from Aristichthys nobilis and its allergic activity
摘要目的 克隆、表达与纯化鳙鱼(Aristichthys nobilis)过敏原小清蛋白,并检测免疫学活性.方法 提取鳙鱼的总RNA,设计简并引物,采用RT-PCR方法扩增目的基因,克隆入T载体中进行测序和分析.将目的基因克隆到pET-28a(+)表达载体中于E.coli BL21( DE3)表达.通过Ni2+亲和层析,对重组蛋白进行纯化,采用免疫印迹(Western-blotting)方法检测其IgE结合活性.结果 获得了鳙鱼过敏原小清蛋白基因,该基因被GenBank收录,登陆号FJ013047.基因开放阅读框共330个碱基(包括终止密码子),编码109个氨基酸,相对分子质量为11 537.Western-blotting结果表明,纯化后的重组蛋白能与过敏性患者血清中的特异性IgE结合.结论 成 功克隆、表达、纯化鳙鱼过敏原小清蛋白,此重组蛋白具有良好的免疫原性.
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栏目名称
论著
发布时间
2011-12-13
基金项目
国家863计划项目资助
广东省科技重点专项资助
深港创新圈计划项目
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