换一批洋葱伯克霍尔德氏菌L68邻苯二酚2,3-双加氧酶基因克隆、表达和纯化
Cloning, Expression and Purification of Catechol 2,3-Dioxygenase from Burkholderia cepacia L68
摘要采用自行设计的引物,从洋葱伯克霍尔德氏菌L68中PCR扩增得到phnE(邻苯二酚2,3-双加氧酶)基因,亚克隆到高表达载体pET 32a上,转入表达菌株中.经双向测序,证实构建过程中未出现突变.重组子经IPTG诱导后,可以表达有活性的重组双加氧酶.选择26 ℃进行重组蛋白诱导.薄层扫描显示,表达重组蛋白总量最高可占总蛋白的64.92%.利用金属螯合层析对重组蛋白进行了一步纯化,SDS-PAGE结果显示,重组蛋白纯度达到95%.
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分类号
Q93（微生物学）
DOI
10.3321/j.issn:1673-1689.2006.03.003
发布时间
2006-07-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
中国科学院项目（非规范项目）（30370014）
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