换一批摘要宇佐美曲霉 (Aspergillus usamii)YL-01-78的糖苷水解酶5家族β-甘露聚糖酶(AuMan5A)是一种仅含催化域(CM)的单结构蛋白.为改善其酶学性质,基于理性设计将海栖热胞菌(Thermotoga maritima)MSB8的27家族碳水化合物结合域(CBM27)融合至AuMan5A的C-端,并采用重叠PCR技术构建融合酶基因Auman5A-cb m27.分别将Auman5A-cbm27和Auman5A在毕赤酵母GS115中进行表达,对重组表达产物reAuMan5A-CBM27和reAuMan5A进行纯化和酶学性质测定.结果表明,reAuMan5A-CBM27和reAuMan5A的最适温度均为68℃;两者分别在68和60℃及以下稳定.同时,前者较后者具有更广泛的pH稳定范围.reAuMan5A-CBM27对角豆胶的Km值由融合前的1.7 mg/mL降至0.7 mg/mL,表明AuMan5A的底物亲和力得到了提高.
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关键词
β-甘露聚糖酶催化域碳水化合物结合域热稳定性底物亲和力β-mannanasecatalytic modulecarbohydrate-binding modulethermostabilitysubstrate affinity
分类号
TS201.25
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1673-1689.2016.11.003
发布时间
2017-02-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（31271811）
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