换一批吡咯喹啉醌高通量检测方法的建立与优化
Establishment and Optimization of the High-Throughput Measurement of Pyrroloquinoline Quinone
摘要吡咯喹啉醌(Pyrroloquinoline quinone,PQQ)是一种新型辅酶,具有广阔的应用前景.传统PQQ检测方法在检测发酵液中PQQ浓度时都存在一定的缺陷,且检测效率偏低.本研究在大肠杆菌(Escherichia coli BL21 (DE3))中表达E.coli K-12来源的葡萄糖脱氢酶(PQQGDH),并通过亲和层析分离纯化PQQGDH,得到了高浓度、高纯度的PQQGDH.通过酶液和PQQ样品用量的双因素正交实验对传统重组酶法的反应体系加以改进,得到适用于96孔板高通量检测的反应体系.结果表明30μL纯化后酶液、2μL PQQ样品配合1.2 mL的显色剂组成的显色体系检测效果最佳.该方法线性范围大且具有较高的精确度和重现性.本研究中利用高浓度、高纯度的PQQGDH配合96孔板和酶标仪,所建立的PQQ高通量检测方法,不仅降低了实验误差,而且大幅提高了PQQ发酵液样品的检测效率.
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关键词
吡咯喹啉醌葡萄糖脱氢酶亲和纯化重组酶法检测高通量检测pyrroloquinoline quinoneD-glucose dehydrogenaseaffinity purificationenzymatic measurementhigh-throughput measurement
分类号
Q814（酶工程）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1673-1689.2017.02.002
发布时间
2017-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家863计划项目（(2012AA022103)）
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