换一批N-端置换提高木聚糖酶AoXyn11A的耐热性
Enhancement in the Thermotolerance of Xylanase(AoXyn11A) by N-Terminus Replacement
摘要为提高米曲霉(Aspergillus oryzae)糖苷水解酶家族(GHF) 11木聚糖酶AoXyn11A的耐热性,将其N-端置换为来源于嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)的同一家族耐热木聚糖酶pXYL11的对应区域.基于木聚糖酶耐热性的理性设计,采用大引物PCR技术将AoXyn 11A基因(Aoxyn11A)的5'-端DNA片段置换为pXYL11人工合成基因(xyn11PM)的对应片段,构建出杂合木聚糖酶ATX11A基因(ATx11A).分别将Aoxyn11A和ATx11A在毕赤酵母GS115中进行了表达,并分析了重组表达产物AoXyn 11A和ATX11A的温度特性.结果表明:ATX11A的最适温度Topt由AoXyn11A的50℃提升至65℃,在60℃的半衰期t1/260为55 rain,较AoXyn11A延长了41.3倍;ATX11A在55℃处理3h保留60％以上的酶活性,而AoXyn11A处理15 min酶活性完全丧失.本研究通过N-端置换显著改善了AoXyn11A的温度特性.
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关键词
木聚糖酶N-端置换耐热性分子动力学模拟理性设计xylanaseN-terminus replacementthermotolerancemolecular dynamic simulationrational design
分类号
Q936（微生物生物化学）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1673-1689.2017.08.011
发布时间
2017-11-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（31271811）
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