换一批
换一批D-阿洛酮糖3-差向异构酶的异源表达和酶学性质
Heterologous Expression and Enzymatic Characterization of D-Psicose 3-Epimerase
摘要克隆了来源于Clostridium bolteae ATCC BAA-613的D-阿洛酮糖3-差向异构酶基因,利用重叠延伸PCR技术在Cb-dpe基因的上游加入了P43启动子,形成P43-Cb-dpe,再将P43-Cb-dpe连接到pMA5载体上构建出双启动子表达载体,并导入到Bacillus subtilis WB800中进行表达;与单启动子表达系统相比,双启动子表达载体能够显著提高Cb-dpe的表达量.对重组Cb-DPE酶进行了分离纯化和酶学性质的研究,结果表明:重组Cb-DPE的最适温度为55℃,最适pH为7.0,在温度30～40℃范围内和pH 6.5～7.5之间有良好的稳定性;Co2+、Mn2+可显著增强酶活;D-阿洛酮糖为底物时,Km为26.68 mmol/L,小于果糖的61.80 mmol/L,说明该酶对D-阿洛酮糖的亲和性比对D-果糖的高.而在动力学参数方面,以D-阿洛酮糖为底物对应的催化效率Kcat/Km为95.8 L/(mmol· main),大于以果糖作为底物时的54.1 L/(mmol· min).
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分类号
Q786
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1673-1689.2018.03.010
发布时间
2018-05-30
基金项目
国家863计划项目项目（2013AA102102）
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