换一批蜂毒肽在大肠杆菌中的高效融合表达与纯化
High-Efficiency Fusion Expression of Melittin in Escherichia coli and Its Purification
摘要生物法制备蜂毒肽是实现大量制备蜂毒肽的关键技术.为实现蜂毒肽的高效表达,通过化学法合成含信号肽、前导肽和成熟肽的蜂毒肽基因promet和蜂毒肽成熟肽基因met,与麦芽糖结合蛋白基因mbp连接,克隆到载体pET15-b,构建重组质粒pET-MBP-MET和pET-MBP-proMET.重组质粒转化大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3),以0.1 mmol/L IPTG进行诱导,30℃下过夜诱导,融合蛋白MBP-MET、MBP-proMET在大肠杆菌中以可溶性形式高效表达.两种目标蛋白质经Ni柱和Dextrin Sepharose HP两步亲和纯化,得到了纯度达90％以上的融合蛋白MBP-MET、MBP-proMET,培养1 L大肠杆菌菌液能制备约20 mg纯蛋白质.通过牛津杯抑菌实验发现,MBP-MET、MBP-proMET能明显抑制细菌生长,产生明显的抑菌圈,MBP-MET和MBP-proMET最低抑菌浓度(MIC)分别为100μg/mL和140μg/mL.本研究首次实现了蜂毒肽的高效表达,并进行了抑菌功能验证,为生物法制备蜂毒肽提供了高效、安全的合成途径.
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DOI
10.3969/j.issn.1673-1689.2020.08.004
发布时间
2020-12-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（31670070）
江苏省"六大人才高峰"高层次人才项目（2015-SWYY-010）
国家轻工技术与工程双一流学科自主课题（LITE2018-12）
高校人才引进项目（111-2-06）
江苏高校品牌专业建设工程项目
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