贝莱斯芽孢杆菌角蛋白酶的克隆表达、纯化及酶学性质
Gene Cloning,Expression,Purification,and Enzymatic Properties Study of Keratinase from Bacillus velezensis
摘要为了获得更好的羽毛粉降解酶,作者从贝莱斯芽孢杆菌基因组中筛选到一个角蛋白酶基因(baker1),对其克隆并在大肠杆菌BL21(DE3)中异源表达,最后对重组角蛋白酶(BaKer1)进行分离纯化、表征及应用研究.结果表明,BaKer1的最适反应pH为9.5,最适反应温度为55 ℃,在中温和碱性条件下具有较好的稳定性.1 mmol/L Ca2+对BaKer1有显著促进作用,5 mmol/L Mn2+对BaKer1有轻微抑制作用,其他金属离子对BaKer1影响不大.PMSF对BaKer1的活性具有显著抑制作用,表明BaKer1是典型的丝氨酸蛋白酶.分别以羽毛粉、偶氮酪蛋白、酪蛋白为底物测定了 BaKerl的动力学参数,Km值分别为5.06、1.09、1.39 mmol/L,kcat/Km值分别为1 058.24、2 536.54、3 733.79 s·mmol/L.BaKer1处理羽毛粉,能达到酸水解效果的33.51%,说明它在羽毛粉降解过程中具有潜在的应用价值.
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