换一批基于识别重叠序列特性的限制性内切酶的重组表达策略研究
Recombinant Expression of Restriction Enzymes Based on Recognition of Overlapping Sequence
摘要甲基转移酶可以保护宿主基因组DNA免受限制性内切酶的消化,根据这一特性,经典的限制性内切酶制备策略是首先通过表达与其配对的甲基转移酶来保护宿主菌株,然后再共表达限制性内切酶,即"一对一"的重组表达模式.作者设计了一个新的策略:通过共表达识别重叠序列的甲基转移酶来保护宿主菌株,以制备限制性内切酶.首先将识别重叠序列的甲基转移酶转入大肠杆菌ER2566,以保护宿主基因组DNA,然后将能识别重叠序列的多个限制性内切酶分别转入该宿主菌株,以进行限制性内切酶的重组表达,即"一对多"的重组表达模式.根据这一方法,利用甲基转移酶M.EsaDix5 Ⅰ、M.Alu Ⅰ和M.Hha Ⅰ实现了识别重叠序列(TTAA、AGCT和GCGC)的一系列限制性内切酶的重组表达,还利用甲基转移酶M.Alu Ⅰ成功实现了两个新的R.Sac Ⅰ同裂酶R.EcoSP4ORF25090P和R.Gma5ORF28P的重组表达.该方法简化了对抵抗限制性内切酶消化的宿主菌株的大量筛选工作,并提供了大规模制备限制性内切酶的能力.这一方法也可用于发现其他微生物中新的同工酶或同裂酶.
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关键词
限制性内切酶甲基转移酶重叠序列同裂酶同工酶restriction endonucleasemethyltransferaseoverlapping sequenceisoschizomersisoenzymes
分类号
Q783.1
栏目名称
DOI
10.12441/spyswjs.20211224002
发布时间
2024-01-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（31601191）
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