换一批小G蛋白ARL3多克隆抗体制备及其突变体鉴定
Preparation of Polyclonal Antibodies Against the Small G Protein ARL3 and Identification of Its Mutants
摘要为探究ARL3在纤毛生成和纤毛信号转导中的功能,制备了兔抗莱茵衣藻ARL3多克隆抗体,并鉴定了 arl3突变体.通过基因克隆获取arl3目的基因,构建原核表达载体pET-28a(+)-arl3,以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主表达融合蛋白6xHis-ARL3.将纯化后的目的蛋白质用于免疫兔子并获得抗血清,随后对抗血清中的protein A和抗原抗体进行纯化,并通过蛋白质免疫印迹检测莱茵衣藻ARL3抗原.结果表明,抗血清效价可达1∶102 400,纯化后的ARL3抗体在1∶400的稀释条件下检测出单一目的条带.表明作者成功制备了高特异性、高灵敏度的兔抗莱茵衣藻ARL3蛋白多克隆抗体,且鉴定出一株arl3突变体,为进一步研究莱茵衣藻ARL3蛋白在纤毛内的功能提供了基础.
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