换一批3-甾酮-9α-羟基化酶的C-1,2位脱氢和C-9位羟基化双重特性的研究
Dehydrogenation at C-1,2 and Hydroxylation at C-9 by 3-Ketosteroid-9α-hydroxylase
摘要[目的]验证来自新金分枝杆菌(Mycobacterium neoaurum)NRRL B-3805的3-甾酮-9α-羟基化酶(KSH)是否具有C-9位羟基化和C-1,2位脱氢功能.[方法]将ksh基因中的加氧酶组分kshA395和还原酶组分kshB122分别在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)BL21(DE3)中进行异源表达,以4-雄烯-3,17-二酮(4-AD)为底物,分别用KshA395、KshB122以及两者等比例混合对其进行酶催化反应.通过对反应体系优化构建pET28a-kshB-kshA等融合质粒,对KSH的双组分酶进行共表达,并以 4-AD为底物进行酶催化反应.[结果]KshA395和KshB122均对4-AD表现出脱氢功能,产物为1,4-雄二烯-3,17-二酮(ADD),未出现羟基化作用;等比例混合的KSH双组分酶在催化4-AD过程中,前期表现出强烈的C-9位羟基化作用,后期羟基化功能关闭,转为C-1,2位脱氢功能.KSH的双组分融合蛋白,包括KshB122-MBP-KshA395、MBP-KshB122-MBP-KshA395、MBP-KshB122-KshA395,在催化4-AD前期表现出C-9位羟基化作用,后期转变为C-1,2位脱氢作用;而KshB122-KshA395仅表现出C-1,2位脱氢作用,未表现出羟基化作用.[结论]在甾醇降解途径中,KSH可以同时承担羟基化及脱氢功能,且先在C-9位羟基化,随后在C-1,2位脱氢,导致甾醇母核B环打开.
更多相关知识
关键词
3-甾酮-9α-羟基化酶C-1,2 位脱氢C-9 位羟基化4-雄烯-3,17-二酮3-羟基-9,10-断裂雄甾-1,3,5(10)-三烯-9,17-二酮3-ketosteroid-9α-hydroxylasedehydrogenation at C-1,2hydroxylation at C-94-androstene-3,17-dione3-hydroxy-9,10-seconandrost-1,3,5(10)-triene-9,17-dione
栏目名称
DOI
10.12441/spyswjs.20231202003
发布时间
2025-06-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
- 浏览0
- 被引0
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
