重组靛蓝色素合成酶快速定量检测L-谷氨酰胺
Rapid Quantitation of L-Glutamine Based on Recombined Blue Pigment Synthetase A
摘要[目标]快速、经济且准确地检测复杂样品中L-谷氨酰胺(L-glutamine,Gln)的浓度.[方法]利用重组大肠杆菌(Escherichia coli)表达的靛蓝色素合成酶(blue pigment synthetase A,BpsA),开发快速精确定量Gln的方法.通过对脱辅基BpsA(apo-BpsA)进行体外活化及测定条件优化获得BpsA全酶(holo-BpsA).[结果]所获holo-BpsA可在适宜条件下于30 min内完成对Gln的定量测定,该方法检测限为10.46 μmol/L,定量限为31.68 μmol/L,板间标准偏差为1.41 μmol/L,板内标准偏差为0.85 μmol/L;针对5种常用培养基的平均加标回收率为94.7%~106.6%,其标准偏差基本在 5%以下.holo-BpsA在-20℃下保存 2个月后,酶活力未见显著变化.[结论]作者开发的基于BpsA快速检测Gln的方法操作简便、专一性强、耗时短,具有较高灵敏度和准确度.
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