慢病毒介导microRNA-214在成牙骨质细胞分化过程中的作用

The functional role of microRNA-214 in the differentiation and mineralization of cementoblasts

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摘要目的:构建microRNA-214沉默慢病毒载体并研究其在成牙骨质细胞分化过程中的作用.方法:常规条件下培养成牙骨质细胞系,并对其进行矿化诱导,检测牙骨质分化及矿化相关标记物的变化.随后,构建microRNA-214沉默慢病毒载体并感染成牙骨质细胞,荧光显微镜观察其感染效率,并用茜素红和Von kossa染色检测不同组成牙骨质细胞的矿化能力,最后检测不同组之间牙骨质分化标志物的变化.结果:Real-time PCR结果显示,随着诱导时间的延长,成牙骨质细胞分化的标志物ALP、Runx2、BSP、OCN、Col1a和CAP mRNA的相对表达量逐渐增加.空白组、阴性对照组和microRNA-214沉默载体组感染成牙骨质细胞系比率达到90%以上.相对于空白组和阴性对照组,microRNA-214沉默组microRNA-214的表达量显著下降,这表明microRNA-214沉默载体很好地发挥了沉默功能.相对于空白组和阴性对照组,microRNA-214沉默组能显著提高成牙骨质细胞的增殖速率.成牙骨质细胞矿化程度的检测发现,相对于空白组和阴性对照组,microRNA-214沉默组矿化结节数量增多,形态变大.同时,成牙骨质细胞分化的标志物ALP、Runx2、OCN、Col1a、BSP和CAP的表达量在microRNA-214沉默组中均显著增加.结论:microRNA-214沉默能够促进成牙骨质细胞分化.