换一批人YAP1基因亚型的质粒构建及表达鉴定
Construction of the recombinant plasmid of human YAP1 gene and the expression of fusion protein
摘要目的:构建人Yes相关蛋白1(YAP1)基因亚型1δ、2δ的真核表达载体并进行瞬时表达鉴定,为研究YAP1亚型间的区别及其在肿瘤中的作用打下基础.方法:在已有pCI2-Flag-YAP1-2γ质粒的基础上,利用重叠PCR增加碱基的方法得到YAP1-2δ的片段,再同理删减WW基因序列得到YAP1-1δ片段,通过Cla I和Sal I两个酶切位点将片段和pCI2载体相连接,构建pCI2-Flag-YAP1-1δ及pCI2-Flag-YAP1-2δ质粒.利用测序确认完整的DNA序列.在HEK293细胞中瞬时转染质粒,用Western blot方法检测YAP1两个亚型的蛋白表达.结果:重组质粒经双酶切和基因测序比对鉴定正确,HEK293细胞经瞬时转染表达出YAP1-1δ和YAP1-2δ蛋白.结论:成功构建了pCI2-Flag-YAP1-1δ及pCI2-Flag-YAP1-2δ真核表达质粒,并在HEK293细胞内过表达成功.为进一步探讨YAP1各亚型对肿瘤发展的影响奠定基础.
更多相关知识
关键词
YAP1基因重叠PCR真核表达重组质粒HEK293细胞YAP1 geneoverlapping PCReukaryotic expressionrecombinant vectorHEK293 cells
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.2095-9400.2018.04.002
发布时间
2018-06-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（81702912）
- 浏览122
- 被引1
- 下载28
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
