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1例FGA IVS2+1G＞T杂合突变导致低异常纤维蛋白原血症的基因突变分析

A single case gene mutation analysis of hypodysfibrinogenaemia associated with heterozygous mutation in fibrinogen α Chain(IVS2+1G>T)

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摘要目的:对临床发现的1例低异常纤维蛋白原血症进行基因分析,探讨其分子发病机制.方法:选取2023年2月17日因"右肾积水,术前凝血功能异常"就诊于温州市人民医院的男性先证者作为研究对象.PCR扩增该患者FGA、FGB、FGG的外显子及其侧翼序列,进行双向测序,明确突变位点.饱和硫酸铵法纯化血浆中纤维蛋白原,进行纤维蛋白原聚集率、凝固率、SDS-PAGE分析;构建包含1-4号外显子的野生型与突变型小基因的pcDNA3.1-载体,转染HEK293T细胞,TRIzol法抽提总mRNA,经过RT-PCR、巢氏PCR、q-PCR验证突变对剪接体功能的影响.结果:先证者Aα链2号内含子IVS2+1G＞T(c.180+1G＞T)杂合突变,该突变导致先证者纤维蛋白原的聚集最大速率(t=443.069,P＜0.001)、吸光度值差值(t=112.317,P＜0.001)与凝固率(t=65.147,P＜0.001)显著降低,SDS-PAGE发现血浆中出现FGA纤维蛋白突变链;构建小基因载体瞬时转染至HEK293T细胞后,经RT-PCR、巢氏PCR与q-PCR发现突变会影响FGA基因mRNA的正常剪接,导致FGA2号外显子序列126bp在翻译过程中缺失.结论:根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)突变评级相关指南,判定FGA IVS2+1G＞T突变变异评级为致病突变.FGA IVS2+1G＞T突变导致有42个氨基酸缺失的异常FGA释放入血,但不影响纤维蛋白原的组装与分泌,表现为低异常纤维蛋白原血症.