换一批
换一批沉默血小板反应蛋白-1基因对亚溶解型C5b-9诱导肾小球系膜细胞分泌细胞外基质的影响
Effects of silencing TSP-1 gene on sublytic C5b-9-induced ECM secretion from glomerular mesangial cell
摘要目的 研究沉默血小板反应蛋白-1(thrombospondin-1,TSP-1)基因对于亚溶解型(sublytic) C5 b-9复合物诱导大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)分泌细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的影响.方法 设计合成针对TSP-1基因4个靶点的小发夹RNA(small hair RNA,shRNA),并构建相应的表达质粒,筛选沉默效率最佳的TSP 1 shRNA(shTSP-1)后,将shTSP 1转染体外培养的大鼠GMC,再给予sublytic C5b-9刺激.以Westernblot检查TSP-1、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)及Ⅳ型胶原蛋白(collagenⅣ)的表达情况.另用ELISA法测定培养上清中总转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和活化TGF-β1的含量.结果 核酸序列分析证明,4种TSP-1 shRNA重组质粒均构建成功.Western blot实验证实,构建的shTSP- 1-3 (Thbs1-3)具有最佳的沉默效率.将shTSP-1-3转染大鼠GMC后,在沉默TSP-1基因表达的同时,能明显抑制由sublytic C5b 9诱导的TGF-β1活化及细胞外基质(FN和collagenⅣ)的合成.结论 TSP-1基因表达在sublytic C5b-9刺激大鼠GMC诱导TGF-β1活化及ECM分泌的过程中,发挥了重要的促进作用.
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分类号
R692
栏目名称
基础研究
DOI
10.3969/j.issn.1671-8259.2012.01.007
发布时间
2012-04-20
基金项目
国家自然科学基金
江苏省高校自然科学研究项目
南京医科大学科技发展基金面上项目
南京医科大学基础医学院青年教师培养基金
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