CHD4蛋白截短体融合蛋白的表达、纯化和鉴定

Expression, purification and identification of CHD4/Mi-2β truncated proteins

二维码有效期 120s

摘要目的构建CHD4/Mi-2β基因的截短体原核表达重组质粒,在大肠杆菌中诱导表达并对GST融合蛋白进行纯化和初步鉴定.方法采用PCR方法扩增CHD4/Mi-2β的染色质调节区(CHD4-C)、解螺旋酶模序(CHD4-H)及DNA结合区(CHD4-D)基因片段,将目的基因片段插入原核表达载体pGEX-5T构建带GST标签的重组质粒,阳性克隆行DNA序列测定.IPTG诱导GST-CHD4-C、GST-CHD4-D和GST-CHD4-H原核表达,谷胱甘肽琼脂糖珠纯化融合蛋白,并对融合蛋白Western blot鉴定.结果构建了3个CHD4/Mi-2β基因的截短体重组质粒;IPTG诱导显示,GST-CHD4-C、GST-CHD4-D和GST-CHD4-H融合蛋白主要以可溶性蛋白形式在细胞裂解液上清中表达,表达产物的相对分子质量分别为130、110、90ku.谷胱甘肽琼脂糖珠纯化融合蛋白,纯化产物的纯度最高可达94.5%.Western blot证实各融合蛋白与抗GST单克隆抗体发生特异性结合反应,分子质量与估计值相符,提示为GST融合表达的CHD4/Mi-2β截短体蛋白.结论成功纯化了较高纯度的GST-CHD4-C、GST-CHD4-D和GST-CHD4-H融合蛋白,为进一步研究CHD4蛋白在染色质重塑中的作用奠定了实验基础.

作者徐涛 ^[1] 张金莉 ^[2] 曾妍 ^[2] 王攀 ^[1] 郎慧芳 ^[3] 万传君 ^[4] 顾永清 ^[1] 学术成果认领

作者单位军事医学科学院放射与辐射医学研究所放射毒理与辐射危害评价研究室,北京,100850;石河子大学医学院生化教研室,新疆石河子,832000 ^[1] 石河子大学医学院生化教研室,新疆石河子,832000 ^[2] 南通大学附属医学院消化科实验室,江苏南通,226000 ^[3] 驻马店卫生学校微生物免疫教研室,河南驻马店,463000 ^[4]

关键词 CHD4/Mi-2β pGEX-5T 融合蛋白蛋白表达纯化

主题词蛋白(Egg White)基因(Genes)质粒(Plasmids)目的(Goals)方法(Methods)

分类号 Q816

栏目名称 基础研究

DOI 10.7652/jdyxb201401003

发布时间 2014-02-12

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国家自然科学基金资助项目