换一批
换一批用一种新方法检测尼古丁减轻鱼藤酮对UPS的毒性
A new method to detect nicotine's effect in alleviating rotenone-induced toxicity of ubiquitin-proteasome system
摘要目的 建立一种动态检测泛素-蛋白酶系统(UPS)活性的新方法,并利用此方法观察尼古丁对鱼藤酮诱导的UPS功能障碍的影响.方法 合成UPS降解信号CL1,将其与含有绿色荧光蛋白的质粒pEGFP-C1连接,构建CL1-pEGFP-C1质粒并转染PC12细胞,经G418筛选后得到稳定表达的CL1-pEGFP-C1细胞系.蛋白酶抑制剂MG132、鱼藤酮或尼古丁+鱼藤酮处理细胞,应用免疫印迹技术检测细胞内GFP含量的变化,荧光显微镜观察细胞荧光强度的变化.结果 稳定转染的CL1-pEGFP-C1细胞无绿色荧光,而MG132处理后细胞内绿色荧光显著增加,且随MG132浓度增加荧光强度逐渐增加,GFP表达逐渐增高(P<0.05).鱼藤酮处理后细胞内绿色荧光显著增加,GFP含量明显高于非处理组(P<0.05).低浓度尼古丁处理组细胞内荧光强度显著降低,GFP蛋白表达显著减少,高浓度尼古丁处理组细胞内荧光强度降低更加显著,GFP蛋白表达减少更明显(P<0.05).结论 成功建立了能够在活细胞中全面、动态检测UPS活性的方法.鱼藤酮可降低UPS活性,尼古丁可减轻鱼藤酮引起的UPS功能障碍.
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