换一批
换一批人PIF1及其截短体重组蛋白的真核表达及其细胞内定位
The eukaryotic expression and intraceilular location of human PIF1 and its truncated recombinant protein
摘要目的 构建人PIF1及其C末端解螺旋酶模序(PIF1C)和N末端PINT结构域(PIF1N)截短体真核表达重组质粒,进行真核表达,并确定PIF1、PIF1C、PIF1N在细胞内定位.方法 以HeLa cDNA为模板PCR获取PIF1、PIF1C、PIF1N编码区cDNA,将其插入pCMV-Tag 2B质粒中构建PIF1、PIF1C、PIF1N真核表达重组质粒;通过lipofectamine2000将重组质粒转染人293细胞中,Western blot方法检测其在真核细胞内的表达,用免疫荧光法检测其细胞内定位.结果 成功构建了PIF1及其截短体真核表达重组体,并在真核细胞内成功表达.确定PIF1定位于核内,PIF1C定位于整个细胞,呈弥散分布,PIF1N主要定位于核内.结论 在真核细胞中成功表达了PIF1、PIF1C、PIF1N,且发现PIF1N对PIF1的入核起重要作用,为进一步研究其PIF1及其各结构域奠定了实验基础.
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关键词
解螺旋酶PIF1重组质粒蛋白表达免疫荧光真核表达helicasePIF1recombinant plasmidprotein expressionimmunofluorescenceeukaryotic expression
分类号
Q78
栏目名称
基础研究
DOI
10.7652/jdyxb201405006
发布时间
2014-10-11
基金项目
国家自然科学基金资助项目
the National Natural Science Foundation of China
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