RNAi沉默ADM表达对人骨肉瘤细胞中β-catenin的作用及对成骨分化的影响

Effect of ADM siRNA on the expression ofβ-catenin and terminal differentiation of osteosarcoma cells

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摘要目的：探讨通过 RNAi方法沉默肾上腺髓质素(ADM)的表达对骨肉瘤细胞中β-catenin蛋白表达的作用及对骨肉瘤成骨终末分化的影响。方法细胞免疫组化方法观察 ADM siRNA转染骨肉瘤细胞系 F5 M2后,β-catenin在0、48、72 h的表达情况；应用 Western blot检测ADM siRNA对F5M2细胞中β-catenin、GSK3β及其磷酸化蛋白的作用。HE染色观察 ADM siRNA处理前后 F5M2细胞形态的变化。观察碱性磷酸酶(ALP)染色、骨钙蛋白(OCN)的表达情况,了解 ADM siRNA诱导 F5 M2细胞成骨终末分化的作用。结果 RNAi 靶向敲低 ADM的表达后,应用细胞免疫组化法观察到β-catenin蛋白从胞质逐渐向胞核内转移；Western blot 结果显示 ADM siRNA 使磷酸化β-catenin蛋白表达降低,而磷酸化 GSK3β表达升高。ADM siRNA 作用骨肉瘤细胞后,细胞形态向良性分化,ALP 染色加深, OCN蛋白表达升高。结论沉默 ADM基因表达能诱导骨肉瘤细胞 F5 M2中β-catenin 的活性增加及向核内转移。体外实验中,ADM siRNA通过活化β-catenin通路诱导骨肉瘤细胞的终末分化。