下调UHRF1表达对食管鳞癌Eca-109细胞放射敏感性的影响

Knock-down of UHRF1 expression enhances the radiosensitivity of Eca-109 cells

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摘要目的研究下调UHRF1对食管鳞癌Eca-109细胞放射敏感性的影响,并对其作用机制进行探讨.方法以人UHRF1基因为靶标设计shRNA序列,慢病毒介导将UHRF1-shRNA转染至Eca-109细胞,qRT-PCR及Western blotting测定转染前后UHRF1 mRNA及蛋白的表达;克隆形成实验评估UHRF1沉默后Eca-109细胞放射敏感性的改变;流式细胞术检测沉默UHRF1对X线照射前后Eca-109细胞凋亡影响;Western blotting检测下调UHRF1、X线照射前后Eca-109细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、caspase-3及AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达的影响.结果成功构建了UHRF1表达稳定下调的Eca-109 shUHRF1细胞系;克隆形成实验显示,UHRF1表达下调后Eca-109细胞的放射敏感性提高;流式细胞术分析显示,shUHRF1组凋亡细胞的比例较NC组增加,而照射后这种趋势更加明显;Western blotting检测显示,与NC组相比,shUHRF1组凋亡抑制蛋白Bcl-2表达量下降,凋亡蛋白Active caspase-3表达量升高,AKT/mTOR信号通路关键分子p-AKT、p-mTOR蛋白表达量下降,而6 Gy X线照射后,Bcl-2、Active caspase-3、p-AKT、p-mTOR蛋白变化较照射前更为明显.结论沉默UHRF1可以增加食管癌Eca-109细胞的放射敏感性,其机制与减弱AKT/mTOR信号通路传导活性及诱导凋亡有关.