换一批病原宏基因组测序DNA检测流程性能验证及结果分析
Performance verification and results analysis of DNA workflow for metagenomic next-generation sequencing
摘要目的 建立病原宏基因组测序(metagenomic next-generation sequencing,mNGS)DNA检测流程的性能验证方案.方法 设计参考品并收集临床样本,从检测限、重复性、稳健性、抗干扰能力、特异性和准确性等维度评价mNGS分析性能,以及对不同建库方式及测序仪性能参数进行评估.结果 参考品内各物种均能稳定检出,mNGS检测限为(5.0E+02)CFU/mL(copies/mL).重复性符合率 100％,批内变异系数(coefficient of variation,CV)介于 8.53％～38.73％.病原投入浓度与检出序列数的线性相关系数|r|＞0.9,mNGS检测系统具有良好的稳定性.抗干扰实验结果显示,人源核酸浓度越高,mNGS检出病原序列数越少.近缘物种检出序列数比值与实际病原浓度比值接近,具有良好的检测特异性.零病原投入组D0检测结果为阴性.临床样本病原检出准确率为90.9％(10/11).自动化移液工作站与手工建库的文库质控结果均合格.三台测序仪运行性能参数均满足或优于出厂标准.结论 初步建立了包含参考品设计、不同建库方式比较和测序仪性能参数评价等多方面在内的mNGS DNA检测流程的性能验证方案,可用于mNGS临床实验室分析性能评价及实验过程中的质量保障.
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关键词
病原宏基因组测序(mNGS)DNA检测性能验证参考品metagenomic next-generation sequencing(mNGS)DNA detectionperformance verificationreference material
分类号
R446.5
栏目名称
DOI
10.7652/jdyxb202501022
发布时间
2025-03-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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