换一批用参数Z表征疏水色谱中脲变α-糜蛋白酶及其折叠中间体的分子构象变化
Characterization of the molecular conformational changes of urea-denatured α-Chymotrypsin and its folded intermediate by parameter Z in high performance hydrophobic interaction chromatography
摘要目的 用参数Z表征疏水色谱中脲变α-糜蛋白酶(α-Chy)及其折叠中间体的分子构象变化.方法 用疏水色谱法对不同脲变条件下的α-Chy进行分离,对收集的不同馏分用基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱(HPHIC-MALDI-TOF-MS)进行检测,并用紫外和荧光光谱对其分子构象变化进行了验证.结果 确认了脲变α-Chy中仅有一个稳定的折叠中间体存在,发现二者的Z值均随脲浓度的增加而减小.在脲浓度范围为0～3.0 mol·L-1时,α-Chy折叠中间体的Z值远小于天然α-Chy的Z值,而脲浓度为4.0 mol·L-1和5.0 mol·L-1时,折叠中间体的Z值稍大于天然α-Chy的Z值.结论 α-Chy折叠中间体的分子构象随脲浓度改变基本呈连续性变化,而天然α-Chy的分子构象随脲浓度呈不连续性变化.进一步发现α-Chy的Z值与其复性回收率之间存在着相似的变化规律.中间体的保留机理服从计量置换保留理论(SDT-R),且得到的参数Z可用来表征天然α-Chy和其折叠中间体的分子构象变化.
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