换一批BVDV中Erns、Npro蛋白真核表达质粒的构建
Construction of Eukaryotic Expression Plasmids for Erns and Npro Proteins in BVDV
摘要目的:试验旨在构建牛病毒性腹泻病毒(BVDV)结构蛋白(糖基化囊膜蛋白Erns)和非结构蛋白(Npro)重组表达载体,利用哺乳动物真核表达系统对Erns、Npro进行表达.方法:参考GenBank中公布的BVDV参考株核苷酸序列分别设计引物Npro-F/R和Erns-F/R,用BVDV病毒的cDNA进行PCR扩增,将回收纯化的Npro和Erns目的基因和真核表达载体pCMV-Myc进行双酶切.利用琼脂糖凝胶电泳进行回收纯化,将回收纯化产物采用T4 DNA连接酶进行连接并转化至BL-21感受态细胞中,构建真核表达质粒,将重组质粒命名为pCMV-Myc-Npro和pCMV-Myc-Erns.双酶切及测序鉴定正确后转染HEK-293细胞,采用PCR及Western blotting检测Npro和Erns在细胞内的表达.结果:pCMV-Myc-Npro和pCMV-Myc-Erns真核表达质粒构建成功,Npro和Erns在HEK293细胞中成功表达.结论:Npro、Erns蛋白的成功表达可为探究蛋白质生物学功能、研究病毒感染机制及研制亚单位疫苗提供理论参考.
更多相关知识
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1009-2102.2024.02.007
发布时间
2024-07-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（31460684）
西北民族大学高原动物疾病创新团队项目（2020-88-07-3）
- 浏览0
- 被引0
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
