换一批
换一批桔梗RAPD-PCR体系的正交优化及引物筛选
The optimization of RAPD-PCR system with orthogonal design and primers screening in Platycodon grandiflorum
摘要[目的]建立桔梗RAPD-PCR反应的最佳体系并应用于桔梗遗传图谱的构建.[方法]以2个桔梗亲本GS16和GS106的叶片DNA为模板,对桔梗DNA的提取及对影响桔梗RAPD-PCR扩增的重要参数进行优化试验,并从530个随机引物中筛选出在2个亲本间具多态性的引物.[结果]叶片研磨后用蒸馏水预洗及2次沉淀时加入3 mol/L NaCl(pH 5.2)溶液,提取的基因组DNA纯度较高.优化的最佳反应体系总体积为25μL.内含ddH2O12.4μL、10×buffer 2.5 μL、引物0.3 μmol/L、dNTPs 200 μmol/L、M2+ 2.5 mmol/L、Taq DNA聚合酶0.5 U、DNA模板40 ng;反应程序为:94℃预变性4 min;94℃30 s,35.3℃ 1 min,72℃ 2 min,40次循环;72℃10 min.按此优化RAPD条件成功地从530个随机引物中筛选出了115个在两亲本间具多态性的引物.[结论]改良的CTAB法能成功用于桔梗基因组DNA提取,建立的最佳反应体系可用于桔梗遗传图谱的构建.
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