换一批
换一批牛RECQL解旋酶的原核表达纯化及解旋条件优化
Prokaryotic expression, purification and optimization of unwinding conditions of Bos taurus RECQL helicase
摘要[目的]通过大肠杆菌表达纯化牛(Bos taurus)RECQL蛋白,利用停流光谱技术对解旋条件进行优化,为研究RECQL的酶促反应动力过程奠定基础.[方法]将人工合成的牛RECQL蛋白编码序列与pET21a载体相连接,获得重组表达载体pET21a-BtRecql后,将其导入大肠杆菌BL21(DE3)菌株中进行诱导表达,经过Ni-NTA亲和层析和Superdex 200凝胶过滤层析,得到纯化的重组蛋白BtRECQL;再利用停流光谱技术对BtRECQL解旋过程进行检测分析,通过摸索不同的试验参数找到BtRECQL发挥解旋功能较适宜的条件.[结果]得到了纯度大于95％的BtRECQL蛋白,产量为0.29 mg/L.在BtRECQL浓度为60 nmol/L,反应条件为1.0 mmol/L ATP,30mmol/L Tris-HCl,pH 7.5,60 mmol/L NaCl,1 mmol/L MgCl2,2 mmol/L DTT,孵育温度为37 ℃时,该蛋白解旋活性较好.[结论]成功表达并纯化了BtRECQL蛋白,确定了其最优的解旋条件.
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关键词
牛RECQL解旋酶原核表达纯化解旋活性Bos taurusRECQL helicaseprokaryotic expression and purificationDNA unwinding activity
栏目名称
动物科学
DOI
10.13207/j.cnki.jnwafu.2017.06.002
发布时间
2017-07-13
基金项目
国家自然科学基金项目
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