换一批利用双向电泳技术分离野牛草叶片蛋白的方法研究
Key Technology of Separation of Buffalograss Leaf Proteome by Applying Two-dimensional Gel Electrophoresis
摘要制备野牛草叶片蛋白质样品,对双向电泳条件等技术环节进行优化,以期获得高分辨率、重复性好的蛋白质双向电泳图谱,建立适应野牛草叶片蛋白组学研究的技术平台,并对其蛋白组进行初步分析.采用TCA/acetone沉淀法和Trizol沉淀法分别提取野牛草叶片蛋白,通过不同聚焦时间分离,最终经硝酸银染色,以Imagemaster 2D Platinum V 5.0图像分析软件对所得的双向电泳图谱进行分析比较.对获得的最佳图谱进行蛋白点分布分析,选择最适合的胶条pH值.结果表明:Trizol沉淀法提取蛋白样品,总聚焦伏时数在8～10万V·h间,为最适合条件,获得图谱背景清晰,纵横纹少,蛋白点分离较完全,在pH3～10胶条凝胶可检测到的蛋白质点达到800个.对蛋白点pH 分布范围分析表明,85%蛋白点分布在pH4～7 之间,选择pH 4～7的IPG胶条,能检测到1 000个以上的蛋白点.以Trizol沉淀法结合优化的双向电泳参数对野牛草叶蛋白组进行双向电泳分离,获得了高分辨率、高重复性的双向凝胶电泳图谱,可用于野牛草差异蛋白质组学研究.
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