换一批蓝舌病病毒NS4基因原核表达载体的构建与表达
Construction and Expression of Prokaryotic Expression Vector of Bluetongue Virus NS4 Gene
摘要蓝舌病病毒(Bluetounge virus,BTV)非结构蛋白4(Non-structural protein 4,NS4)拮抗干扰素的产生,在BTV逃避宿主天然免疫的过程中发挥重要作用.利用PCR扩增得到NS4基因,与空载体pET-32a双酶切后连接,构建pET-32a-NS4 原核表达载体;将pET-32a-NS4转化至E.coli BL21感受态细胞,以IPTG诱导表达;利用SDS-PAGE确定IPTG的最佳诱导浓度、时间与重组蛋白的表达形式;利用Western blot分析重组蛋白的表达情况.结果表明,成功构建pET-32a-NS4原核表达载体;IPTG最佳诱导浓度为0.8 mmol/L,时间为6 h,蛋白主要以包涵体形式表达;Western blot在27 ku处可见目的条带,与预期相符.本研究成功构建pET-32a-NS4原核表达载体,实现NS4蛋白的大量、高效表达,为进一步探究NS4蛋白在BTV拮抗宿主天然免疫中的作用机制提供材料.
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