换一批人源噬菌体抗体库的构建及抗人NH-LBP抗体的筛选与鉴定
Construction of human phage antibody library and screening and characterization of phage antibodies against N terminal fragment of human lipopolysaccharide binding protein
摘要目的: 构建人源噬菌体抗体库并制备抗人脂多糖结合蛋白氨基端片段(NH-LBP)的单克隆抗体(mAb).方法: 以噬菌体展示系统(pComb3H/VCSM13)建立人源噬菌体抗体库(Fab), 并以昆虫细胞sf21在无血清培养基(SF-900Ⅱ)中, 通过BAC-TO-BAC杆状病毒表达系统来表达NH-LBP.再以NH-LBP为抗原, 从人源噬菌体抗体库中筛选可产生抗NH-LBP mAb的菌株并进行鉴定. 结果: 昆虫细胞sf21可表达人源NH-LBP, 经亲和纯化柱芯(TALON)有效纯化后, 获得约8 mg 的NH-LBP.成功地建立人源噬菌体抗体库, 库容达5.0×108 CFU.经8轮筛选后, 抗体库被富集1.85×104倍.经ELISA法鉴定, 获得3株可产生抗NH-LBP mAb的菌株(核酸序列及氨基酸序列见GenBank中的: AY337713, AY337714). 结论: 以昆虫细胞sf21表达NH-LBP及以其为抗原制备噬菌体mAb是可行的.本研究为进一步建立抗NH-LBP的二硫键稳定的Fv抗体( disulfide stabilized Fv fragments, dsFv), 研究人体内LBP的变化规律和过度炎症反应的防治奠定了基础.
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分类号
R392.11（医学免疫学）
栏目名称
DOI
10.3321/j.issn:1007-8738.2005.02.014
发布时间
2005-03-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（30271342）
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