换一批
换一批摘要目的: 构建与肝癌细胞特异性结合的单链抗体-AP融合蛋白,并诱导表达.方法: 提取从大型人源噬菌体抗体库中筛选的含有与HCC特异性结合的scFv-10基因的质粒,用Sfi I、 Not I分别酶切, 连接至经同样双酶切后的原核分泌型表达载体pDAP2上, 转化和筛选后, 阳性细菌经IPTG诱导表达, 细胞ELISA鉴定融合蛋白活性.结果: 重组质粒经PCR扩增, Eco 91Ⅰ单酶切及Eco 91Ⅰ/Not I双酶切鉴定, 证明scFv-10基因已插入到原核分泌型表达载体pDAP2上.表达产物的定位分析表明融合蛋白主要分泌性表达到周质腔,细胞ELISA证明表达产物有与HCC结合的活性.结论: 成功地构建并表达了与HCC特异性结合的单链抗体-AP融合蛋白,为其应用奠定了基础.
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主题词
蛋白(Egg White)敏感性与特异性(Sensitivity and Specificity)单链抗体(Single-Chain Antibodies)碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase)细胞(Cells)
分类号
R392
栏目名称
抗体工程
DOI
10.3321/j.issn:1007-8738.2005.06.016
发布时间
2005-12-08
基金项目
国家重点基础研究发展计划(973计划)
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