换一批
换一批摘要目的:探讨猪前体脂肪细胞与肌卫星细胞体外直接联合培养的适宜体系.方法:将分离纯化、鉴定的猪前体脂肪细胞与骨骼肌肌卫星细胞按1:1(Ⅰ组)、1:2(Ⅱ组)、1:4(Ⅲ组)浓度比混合培养, MTT比色绘制2 ～9 d内细胞生长曲线, 经倒置显微镜观察第9 天细胞生长状态, 选取最佳浓度比重复联合培养, 通过血细胞板计数测定72 h内细胞贴壁率, 分析得最佳贴壁时间, 并比较不同培养液 (M199、DMEM/F12、M199+100 mL/L FBS、DMEM/F12+100 mL/L FBS、RPMI+100 mL/L FBS、DMEM+100 mL/L FBS)及血清浓度(10 ～200 mL/L FBS)对细胞贴壁率的影响.结果:Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组细胞生长曲线与形态学观察显示, 前体脂肪细胞与肌卫星细胞以1:4浓度比联合培养至9 d时, 细胞增殖率可达到最大、生长状态优于Ⅰ、Ⅱ组;通过细胞计数发现联合培养细胞贴壁率在48 ～66 h之间趋于稳定, DMEM/F12+100 mL/L FBS培养液培养效果显著优于其他培养液(P＜0.05);在测定1 ～100 mL/L血清浓度范围内, 联合培养细胞贴壁率的升高对血清浓度具有依赖性.结论:使用含100 mL/L胎牛血清的DMEM/F12(1:1) 培养液, 将前体脂肪细胞与肌卫星细胞以1:4浓度比混合接种, 在联合培养48 h后第1次换液, 可保持联合培养细胞良好的贴壁与增殖状态.
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