换一批
换一批摘要目的:制备鼠抗人乙醛酸还原酶/羟基丙酮酸还原酶单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定.方法:将正常成人肝组织匀浆离心并分离出肝脏胞质总蛋白,用肝脏胞质总蛋白免疫BALB/c 小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,并通过间接ELISA法、Western blot及免疫组化的方法对mAb进行特异性鉴定,通过免疫沉淀联合质谱和Uni-ZAP XR表达文库筛选鉴定抗原.结果:通过间接ELISA筛选获得杂交瘤细胞株ADB291,其分泌的mAb Ig亚类(型)为IgG1(κ),Western blot结果显示该mAb识别相对分子质量(Mr)为35 000的蛋白;对免疫沉淀获得的相应抗原回收、酶切、质谱鉴定为GRHPR.同时应用mAb ADB291对人肝脏cDNA表达文库(Uni-ZAP XR)进行筛选,筛选所获得的阳性噬菌斑测序结果显示2个阳性克隆插入序列均为GRHPR;阳性克隆转化表达后的Western blot 结果确认该抗体识别Mr 35 000的表达蛋白.结论:mAb ADB291特异识别的抗原为GRHPR,该mAb在GRHPR的功能研究和二型原发性尿草酸盐过多遗传疾病的临床诊断等方面具有应用价值.
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主题词
抗体, 单克隆(Antibodies, Monoclonal)乙醛(Acetaldehyde)羟基丙酮酸还原酶(Hydroxypyruvate Reductase)蛋白(Egg White)免疫(Immunity)
分类号
R392.11
栏目名称
抗体工程
DOI
10.3321/j.issn:1007-8738.2007.09.019
发布时间
2007-10-29
基金项目
国家高技术研究发展计划(863计划)
国家重点基础研究发展计划(973计划)
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