预防性重组HPV58-减毒志贺氏杆菌载体活疫苗的研制及免疫学特性

Construction of prophylactic recombinant HPV58-attenuated Shigella vector live vaccine and evaluation of its protective efficacy and immunogenicity in the Guinea pig Keratoconjunctivitis Model

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摘要目的:构建预防性重组HPV58-减毒志贺氏杆菌载体活疫苗,并研究其免疫学特性.方法:克隆HPV58L1基因并重组入自杀载体pCVD442,减毒志贺氏杆菌Sf301:△virG、辅助质粒PRK2013、重组自杀载体pCVD442-HPV58L1进行筛选杂交,经氨苄抗性培养基、刚果红培养基双重选择,获得重组的含HPV58L1基因的减毒志贺氏杆菌菌株.Western blot检测HPV58L1蛋白表达.用豚鼠角结膜炎模型进行疫苗动物免疫试验,ELISA检测豚鼠血清中特异性抗体,ELISPOT检测豚鼠脾及淋巴结中抗原特异性IgG、IgA产生细胞频数.结果:Western blot法证实该菌株可表达HPV58L1蛋白.豚鼠免疫保护试验发现:HPV58L1-减毒志贺氏杆菌不引起角结膜炎,经用野生型sf301攻击后有80%豚鼠不发病.免疫后第20天,免疫豚鼠血中抗HPV58L1特异性IgG、IgA明显升高,而对志贺氏杆菌菌体抗原(LPS)仅产生低效价的IgG抗体.EHSPOT结果显示,脾和淋巴结的IgA-ASC及IgG-ASC明显升高.结论:成功构建了预防性重组HPV58-减毒志贺氏杆菌载体活疫苗,能诱发免疫动物较强的体液免疫反应,激发保护性抗体的产生.