shRNA表达载体pWH1的构建及用于HIF1基因的沉默

Construction of shRNA expression vector pWH1 and its function in silencing the HIF1 gene

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摘要目的:构建用于RNAi的shRNA(small hairpin RNA)表达载体及检测其对低氧诱导因子-1(Hypoxia-inducible Factor-1,HIF1)基因的沉默效果.方法:从人血基因组中PCR扩增出H1基因启动子,克隆入酶切处理后的pEGFP-C1载体片段中,此载体命名为pWH1.以人HIF1 cDNA基因为靶标设计引物,退火后克隆入pWH1.新的载体转染SGC7901细胞,然后用RT-PCR和Western blot检测HIF1基因的表达改变.结果:构建的pWH1载体能很好地表达针对HIF1基因的shRNA,RT-PCR和Western blot的结果显示HIF1基因的mRNA和蛋白表达水平均明显下降.结论:成功构建了shRNA表达载体pWH1,这对于基因的功能研究具有重要的意义.

作者吴元明 ^[1] 张晓楠 ^[2] 韩者艺 ^[3] 李春英 ^[4] 陈南春 ^[2] 学术成果认领

作者单位第四军医大学基础部病理学与病理生理学教研室,陕西,西安,710032 ^[1] 第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,陕西,西安,710032 ^[2] 第四军医大学西京医院全军消化病研究所,陕西,西安,710032 ^[3] 第四军医大学西京医院皮肤科,陕西,西安,710032 ^[4]

关键词 shRNA 表达载体 RNA干涉 HIF1基因

主题词基因(Genes)人(Persons)目的(Goals)毛发(Hair)低氧(Hypoxia)

分类号 R344.11

栏目名称 基础研究

DOI 10.3321/j.issn:1007-8738.2008.02.005

发布时间 2008-05-05

基金项目

国家自然科学基金 陕西省自然科学基金