换一批
换一批MyD88-铜绿假单胞菌表位核酸疫苗的构建及其真核表达
Construction of MyD88-pseudomonas aeruginosa epitope DNA vaccine and its expression in eukaryotic cells
摘要目的:构建重组MyD88基因的铜绿假单胞菌(PA)表位核酸疫苗,并研究其在真核细胞中的表达.方法:将PA的OprF的三个中和性B细胞表位及一个外源通用T细胞表位串联,表位之间用赖氨酸间隔,采用重叠PCR方法合成全基因,并在此序列前插入组织纤溶酶原激活物(tPA)的信号肽基因,将获得的片段与MyD88基因分别克隆到pIRES载体的两个多克隆位点,构建真核双表达重组质粒pIRES-tPA-OprF-MyD88.电穿孔法将pIRES-tPA-OprF-MyD88转入COS-7细胞,通过Western blot检测其细胞上清tPA-OprF蛋白及细胞内MyD88蛋白的表达.结果:构建的真核表达质粒pIRES-tPA-OprF-MyD88,经电转COS-7细胞后,在其培养的上清液及细胞内检测到目的蛋白.结论:成功构建pIRES-tPA-OprF-MyD88表达载体,并在转染的真核细胞中得以有效地表达,为研究PA预防性疫苗奠定了实验基础.
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分类号
R392.7
栏目名称
基础研究
DOI
10.3321/j.issn:1007-8738.2009.03.001
发布时间
2009-04-29
基金项目
国家自然科学基金
江苏省社会发展科技项目
江苏省卫生厅面上项目
镇江市社会发展项目
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