换一批
换一批抗AGR2单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用
Preparation,characterization and potential application of monoclonal antibody 18A4 against AGR2
摘要目的:制备鼠抗AGR2单克隆抗体(mAb)并对其特性进行鉴定及其初步应用研究.方法:以AGR2-MBP融合蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备鼠抗AGR2的mAb,并用Protein-C亲和层析法纯化mAb.用间接ELISA法测定mAb的效价,以Western blot鉴定mAb的特异性.用免疫荧光、免疫沉淀和MTT法对mAb进行初步应用研究.结果:获得1株可持续、稳定分泌抗AGR2的mAb的杂交瘤细胞.杂交瘤细胞分泌的mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ),腹水mAb的效价达1×10~(-6).Western blot检测显示,在Mr为20 000处有1条清晰的带.免疫荧光显示,该mAb可与乳腺癌细胞中的AGR2蛋白结合.免疫沉淀证实该mAb可与天然状态的AGR2有效结合.MTT实验显示该mAb对乳腺癌细胞MCF7的生长有抑制作用.结论:制备出的鼠抗AGR2的mAb效价高、特异性良好,可抑制细胞的生长,有一定的应用价值,为进一步研究AGR2的功能及其在乳腺癌、前列腺癌等癌症的诊断和治疗中的作用提供了工具.
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