换一批
换一批平榛主要过敏原一个片段区基因的克隆表达及免疫鉴定
Cloning and expression of a fragment of Corylus heterophylla 1 and identifying its immunologic competence
摘要目的:克隆表达平榛(Cor h)主要过敏原Cor h 1的一个片段区基因,并纯化表达的蛋白及检测其免疫学活性.方法:采用生物信息学方法选取Cor h 1的主要抗原表位区,设计带有酶切位点的特异性引物,采用RT.PCR方法扩增目的基因,将其导入pMD18-T载体中测序.将测序正确的质粒双酶切,并将获得的片段基因导入pET-32a中表达.通过Niz+亲和层析柱纯化重组蛋白,采用Western blot方法检测其IgE结合活性.结果:克隆并获得了Cor h 1的主要表位区基因,基因开放阅读框为243个碱基,编码81个氨基酸,蛋白相对分子质量(M,)约为9 000.表达的蛋白以可溶性为主,纯化出的蛋白有较好的免疫原性.结论:成功地克隆表达了Cor h 1的主要表位区基因,蛋白具有良好的免疫学活性.
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