换一批抗VEGFR2/抗CD3双特异单链抗体的表达及初步活性检测
Expression and immunological activity of an anti-CD3 × VEGFR2 bispecific single-chain antibody
摘要目的:构建和表达抗血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)/抗CD3双特异单链抗体(bscVEGFR2×CD3),及亲和活性测定.方法:设计抗VEGFR2/抗CD3双特异单链抗体基因序列,由公司合成并亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,脂质体法转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO),筛选高效分泌表达bscVEGFR2×CD3的克隆株.表达产物经Ni-NTA柱纯化,120g/L SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定.应用流式细胞术(FCM)检测生物学活性.结果:bscVEGFR2×CD3重组表达载体测序证实序列正确.bscVEGFR2×CD3能够在CHO细胞中进行分泌表达,筛选出6株高表达克隆株.120g/L SDS-PAGE显示相对分子质量(Mr)约56 000有1条带,与预期相符,Western blot证明anti-His抗体能与这条蛋白条带发生特异性结合.FCM检测bscVEGFR2×CD3能与CD3+jurkat细胞和VEGFR2+A375细胞特异性结合.结论:成功构建和表达抗VEGFR2/抗CD3双特异单链抗体,该抗体具有与VEGFR2、CD3特异性结合的免疫学活性.
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医学主题词
单链抗体(Single-Chain Antibodies)细胞(Cells)敏感性与特异性(Sensitivity and Specificity)抗体(Antibodies)目的(Goals)
分类号
B392.11
栏目名称
发布时间
2011-10-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
哈尔滨市科技创新人才研究专项（2008RFXXS018）
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