换一批
换一批骆驼重组SpaA-N单域抗体的制备与性质研究
Preparation and property study of the recombinant Camel anti-SpaA-N single domain antibodies
摘要目的:获得特异识别SpaA-N的单域抗体.方法:用His-SpaA-N重组抗原从新疆双峰驼单域抗体噬菌体展示文库中,筛选SpaA-N的结合子.经测序后亚克隆至pET30a并在E coli BL21高表达,用镍离子亲和层析柱纯化.ELISA分析重组单域抗体的热稳定性,Western blot检测结合特异性.结果:经His-SpaA-N筛选富集后,筛选得到2个目的克隆.构建至pET30a,PCR和酶切鉴定目的基因大小与预计相符.SDS-PAGE显示,Mr29 000和23 000有特异性目的条带.ELISA检测显示,抗SpaA-N的VHH对SpaA-N重组蛋白具有很好的结合活性；VHH热变性后,经室温复性均可以恢复其抗原结合活性.Western blot显示,重组VHH在Mr66 000处可以识别丹毒丝菌中存在的表面蛋白.结论:获得了具有热稳定性和特异结合SpaA-N的单域抗体,为进一步研究spaA抗原在丹毒丝菌感染免疫中的作用提供了基础.
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